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많은 버섯들이 무균적인 방법으로 배양될 수 있으며 생체 자실체의 내부 무균조직이나 생체 자실체의 자실층 표면에 형성되는 포자를 접종하여 균사를 배양할 수 있다. 무균 조작으로 분리된 생체 조직은 보통 Malt Extract Agar(malt extract 10%, agar 2%)나 Yeast Extract Agar(yeast extract 3g, glucose 10g, K2PO4 2g, MgSO47H2O 0.2g, agar 20g, D.W. 1 liter)에 접종하면 24°C나 실온에서 잘 자란다.
접종 후 2일 내지 1주일 정도 지나면 조직 주변에서의 균사 생장이 육안으로 확인되 고, 배양적 특성을 계속 조사하기 위해서는 보통 수주간 정기적으로 관찰을 실시한다. 일부 외생균근 버섯은 균사생장이 매우 늦기에 한달정도 지켜봐야 하는 종류들도 있다. 포자의 배양을 시도하려면 주름이나 구멍과 같은 포자 형성층 즉, 생체 자실층 절편을 분리하여 페트리디쉬 뚜껑의 안쪽에 글리세린과 같은 접착제로 부착시켜 균류에 따라 매 10분에서 30분 간격으로 60도 내지 90도씩 뚜껑을 돌려가며 회전시켜 포자를 낙하시킨 후 배양을 실시한다. 이 때 포자가 담겨있는 페트리디쉬는 해부 현미경으로 6시간 내지 12시간 간격으로 포자 발아 여부를 확인한 뒤 발아가 확인되면 멸균 침봉으로 단포자를 분리한 후 계대 배양하면 단포자 배양을 수행할 수 있다.